MilliporeECL发光液比DAB显色灵敏度高千倍以上。在暗房内高丰度蛋白条带的荧光常常数小时内仍然肉眼可见，X线胶片曝光5～30s即可得到高清晰条带；低丰度蛋白条带荧光肉眼可能不易察觉，但曝光30s~5min即可检测条带；极低丰度的蛋白条带荧光可允许30min~12h曝光以检测目的条带。MilliporeECL发光液衰减较慢，20min内荧光几无减弱，检测时产生的非特异背景非常低，也可节省抗体和待测样品的用量
 

　　1.保鲜膜的质量。a.国产的保鲜膜，很多厂家偷工减料打价格战，造成保鲜膜很薄亦破损。ECL滴加到保鲜膜上容易从肉眼不易分辩的小孔泄露，一方面ECL反应不充分，另一方面ECL所含液体会溶解试验台上残留未知的化学药品颗粒(也许你或其他人曾经不小心打翻过某种化合物)、灰尘等等，造成荧光淬灭。在简述原理时，我曾经提到过很多化合物、金属离子能直接催化过氧化物水解，在极短的时间内消耗掉所有的HRP酶，荧光转瞬即逝。
 

　　b.保鲜膜的化工原料或拉制过程中，残留未知的化学试剂，引起荧光淬灭；廉价的保鲜膜问题尤多。
 

　　目前，国产的就“妙洁”比较过关，保鲜膜厚度和化学物残留都不影响ECL显影。
 

　　如果买不到合格的保鲜膜，也可以用其他物品替代；但要特别注意这些支持物表面的干净，好不要有任何化学试剂残留，包括风干的TBST盐结晶颗粒。
 

　　2.ECL孵育结束后膜需要控干。中学物理学过水会吸收光谱，因此任何液体包括ECL溶液本身都会干扰荧光强度，所以ECL孵育结束时需要控干。一般夹起膜，让膜的一角或一边接触吸水纸；但是请注意不能让膜干掉。某些信号较弱的ECL，膜干掉后荧光会消失；较好的试剂盒，荧光相对稳定，但吸干以后，背景荧光也会升高，而且会严重影响重新标记新抗体时的背景。因此，按照我的方法，让自由流下的多余的ECL被吸走就好。
 

　　3.控干的膜要仔细用保鲜膜包被，防止接触外界异物造成荧光淬灭；同时，包裹保鲜膜时要细心，尽量不让正面保鲜膜和膜之间出现皱褶。皱褶的地方会堆积多余的ECL，要么形成一条荧光的亮线；要么由于液体吸收荧光或者局部区域HRP过度消耗，呈线条状淬灭。
 

　　4.在膜放入压片夹之前，好肉眼观察一下荧光信号的强弱，这有利于判断实验可能出现的问题。很多人提问看见很强的荧光了，但怎么压片都没有信号，那么就是快速淬灭(闪灭，再怎么快速操作也拿不到这种情况下的荧光信号)造成的；有这个观察至少能够判断ECL孵育之前实验操作应该问题不大，而问题主要是淬灭。如果你省略这个步骤，那问题就非常复杂了，因为之前任何操作都可能导致白板，根本无法判断。