MILLIPOREECL化学发光底物是指在化学发光反应中参与能量转移并zui终以发射光子的形式释放能量的化合物。在发光免疫技术中常用的化学发光底物有以下几类。

　　

　　1．氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是zui常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5'-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下：

　　

　　鲁米诺反应结构式

　　

　　鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。异鲁米诺衍生物ASEI和ABMI等也是常用的标记物。

　　

　　2．吖啶酯（acridiniumester，AE）类类发光剂不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。反应式如下：

　　

　　电化学发光原理

　　

　　上式反应迅速，在1～5s内即可完成；具有背景低、信比高的优点，其检测极限可达5×10-9mol，发光量与AE浓度呈良好的线性反应，是一类的标记物。

　　

　　3．电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）反应在电极表面进行。发光底物为三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]，另一反应物为三丙胺（TPA）。在阳电极表面，以上两化学物质可同时失去电子发生氧化反应（图2）。二价的Ru(bpy)32+被氧化成三价Ru(bpy)33+，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者失去一个质子（H+），成为自由基TPA●，这是一个强还原剂，可将一个电子递给三价的Ru(bpy)32+*，而TPA自身被氧化成TPA氧化产物。激发态的Ru(bpy)32+*在衰减时发射一个波长为620nm的光子，重新生成基态的Ru(bpy)32+。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使信号得以增强。

　　

　　4．MILLIPOREECL化学发光底物产品特点

　　

　　灵敏：信号强背景低，所需抗原抗体量少。

　　

　　持久：发光时间长，可进行反复曝光，进行结果优化，而不需要重复Blot。

　　

　　快捷：MILLIPOREECL化学发光底物操作简单方便，且数秒内即可产生强烈信号。

　　

　　定量：使用反射型显像密度计或者CCD相机扫描已曝光的X光片，可对目的蛋白进行定量。

　　

　　稳定：产品有效期长，4℃可保存1年；且曝光后X光片上的印迹不褪色，可使实验结果长期保存。