凯杰qiagen 76506 RNAprotect Bacteria Reagent

RNAprotect Bacteria Reagent可在RNA纯化步骤前立即稳定RNA，从而确保可靠的基因表达和分析数据。在细菌培养基中直接加入试剂即可稳定革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。

凯杰qiagen 76506 RNAprotect Bacteria Reagent

GeneChip分析。

使用RNeasy Protect Bacteria Kit（RNeasy Protect Bacteria）从RNAprotect稳定的E. coli培养物中分离总RNA，或者使用商品化的沉淀方法（Supplier E_III）从未稳定的培养物中分离总RNA。在分离RNA前将RNA聚合酶抑制剂利福平加入到一半的培养物中，以区分在限定培养条件下的基因表达以及在收集和RNA分离过程中人为基因诱导的作用。加入和未加入利福平时转录水平的差异基本上反映出RNA降解的程度。[A] 参照标准的Affymetrix实验方案对E. coli微阵列进行GeneChip分析。[B] 通过GeneChip分析测得的不同转录本数目除以微阵列中的转录本总数，评估基因表达百分比。（数据来自于与Affymetrix合作开展的一项研究。）

RNAprotect Bacteria Reagent防止mRNA降解。

将RNA聚合酶抑制剂利福平加入到E. coli培养物中，停止转录，仅监测RNA的降解。培养物分为两半，在其中一半加入RNAprotect Bacteria Reagent。样本置于室温0、4、8和16分钟后离心并分离RNA。采用琼脂糖凝胶电泳分析获得的RNA（上图）。采用northern印迹分析检查两半培养物中两种标记基因的表达。中图：ompA（半衰期15分钟）；下图：α-内酰胺酶（半衰期2–5分钟）。