凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物试剂
凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
纯化得到至多500 μg无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
纯化得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg
纯化流程快，同时去除内毒素
获得高产量的高拷贝质粒DNA
使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液，DNA产量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，非常适合超转染级纯的应用。
质粒纯化方法与转染效率。
使用两种方法独立制备pRSVcat，分别使用脂质体介导的方法转染到COS-7、HeLa和LMH细胞中，及使用磷酸钙转染至Huh7细胞中。平均转染效率以相对于QIAGEN Plasmid Kit制备的DNA的转染效率表示。
凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
EndoFree Plasmid Maxi Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中，不需要额外步骤，也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Maxi Cartridge过滤细菌裂解液，通过重力流QIAGEN-tip 500阴离子交换柱纯化质粒DNA。100–250 ml培养菌液至多可纯化500 µg DNA。（培养量取决于质粒拷贝数量、插入片段大小、宿主菌和培养介质。）纯化的DNA无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。
| 质粒准备方法 | 内毒素(EU†/µg DNA) | 平均转染效率‡ |
|---|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
| QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100 |
| 2x CsCl | 2.6 | 99% |
| Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
| DNA纯化方法 | 转染细胞百分比 |
|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
| QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
| Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。
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